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抗性筛选与植株再生共培养结束后,将幼胚转移至含筛选压力的培养基上,分批筛选抗性愈伤组织,淘汰未转化的阴性细胞;将阳性抗性愈伤转入分化培养基,诱导芽体分化,再转入生根培养基培育完整幼苗;炼苗后移栽至温室培养,获得T0代植株。分子鉴定与纯合株系筛选对T0代植株提取DNA,通过PCR、Southern杂交检测外源基因整合情况,通过RT-PCR、Westernblot检测基因表达水平;收获T1代种子后,连续多代自交,结合分子检测筛选获得遗传稳定的纯合株系。主要应用场景一是水稻种质改良与新品种培育,通过导入抗虫、抗稻瘟病、抗白叶枯病、抗除草剂、耐盐碱、低镉积累、蒸煮品质等功能基因,培育高产、、绿色、抗逆的水稻品种;二是基因功能解析,通过基因过表达、沉默、敲除体系,研究水稻生长发育、逆境响应、物质合成代谢的分子机制;三是分子育种,结合基因编辑技术实现水稻定向性状改良,烟草转化,缩短育种周期。载体构建与菌株活化根据实验需求构建植物表达载体,将目的基因、特异性启动子、终止子、抗性筛选标记(潮抗性、草铵抗性为水稻常用筛选标记)插入二元载体T-DNA区域,测序验证序列无误后,将重组载体导入EHA105等农杆菌感受态细胞,筛选阳性单菌落,活化备用。2.水稻愈伤组织诱导选取饱满无破损的水稻成熟种子,去除外壳,经过酒精、次梯度无菌消毒后,接种于愈伤诱导培养基。26–28℃避光暗培养2–3周,诱导种子盾片产生淡黄色、颗粒状、致密的胚性愈伤组织,剔除褐化、水渍化的无效愈伤,挑选胚性愈伤作为转化受体。烟草转化-贝科新肽(在线咨询)由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司拥有很好的服务与产品,不断地受到新老用户及业内人士的肯定和信任。我们公司是商盟认证会员,点击页面的商盟客服图标,可以直接与我们客服人员对话,愿我们今后的合作愉快!)
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