马铃薯基因转化-武汉贝科新肽科技公司(图)
侵染与共培养农杆菌菌液调至OD600=0.6–0.8,愈伤浸泡侵染10–20min,轻微震荡;侵染后捞出愈伤,无菌滤纸吸干表面所有菌液(积水是褐化、菌污染主要原因)。平铺于共培养基,25℃暗培养2–3天,以愈伤表面微微出现薄层菌膜为状态。抗性筛选与继代共培养结束后,无菌水洗去表面农杆菌,可低浓度水洗一次,吸干水分后接种筛选培养基。首轮筛选14天后,剔除褐化、愈伤,将新生嫩黄抗性愈伤切下继代。连续2–3轮筛选,去除假阳性与残留农杆菌,获得纯净阳性愈伤群体。机制将外源目的基因质粒包裹在金粉、钨粉等微米级微粒表面,通过基因高压动力加速微粒,高速穿透玉米细胞壁与细胞膜,将外源DNA直接送入细胞核,进而整合到玉米基因组中。适用场景可适配玉米愈伤组织、幼胚、悬浮细胞等多种受体,不受农杆菌侵染宿主限制,适用于农杆菌转化效率极低的特殊玉米基因型,以及多基因共转化、基因编辑载体递送等特殊实验。基因轰击法(微粒轰击法)纯物理转化技术,不依赖农杆菌生物侵染体系,是水稻早期研究的方法,马铃薯基因转化,目前仅作为特殊实验的辅助手段。1.机制将重组质粒DNA包裹于金粉、钨粉微米级微粒表面,通过基因高压加速微粒,穿透水稻细胞壁与细胞膜,将外源DNA送入细胞核,随机整合至水稻基因组中,实现基因转化。2.适用场景适配农杆菌侵染困难的特殊籼稻基因型、水稻悬浮细胞、原生质体;可用于多基因共转化、基因编辑载体瞬时表达、细胞器基因转化等特殊实验场景。马铃薯基因转化-武汉贝科新肽科技公司(图)由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司位于武汉市洪山区雄楚大道339号林业局林木种苗管理总站科技楼6楼606。在市场经济的浪潮中拼博和发展,目前贝科新肽在化学试剂中享有良好的声誉。贝科新肽取得全网商盟认证,标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。贝科新肽全体员工愿与各界有识之士共同发展,共创美好未来。)
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