番茄基因转化-武汉贝科新肽公司(图)
玉米基因转化原理玉米基因转化的逻辑是外源基因递送—基因组整合——稳定遗传表达。利用生物介导或物理化学手段,将携带目的基因的外源DNA片段导入玉米受体细胞,通过DNA同源重组或随机整合机制,使外源基因稳定嵌入玉米核基因组;再通过植物组织培养技术,将转化后的单细胞、愈伤组织或幼胚再生为完整植株,终筛选获得可稳定遗传外源性状的玉米株系。与模式植物拟南芥不同,玉米属于单子叶禾本科作物,自然状态下难以被农杆菌侵染,且愈伤组织分化、再生难度高、基因型依赖性强,因此需要针对性优化转化载体、侵染体系与组培方案,才能实现转化。抗性筛选与植株再生共培养结束后,将幼胚转移至含筛选压力的培养基上,分批筛选抗性愈伤组织,淘汰未转化的阴性细胞;将阳性抗性愈伤转入分化培养基,诱导芽体分化,再转入生根培养基培育完整幼苗;炼苗后移栽至温室培养,获得T0代植株。分子鉴定与纯合株系筛选对T0代植株提取DNA,通过PCR、Southern杂交检测外源基因整合情况,番茄基因转化,通过RT-PCR、Westernblot检测基因表达水平;收获T1代种子后,连续多代自交,结合分子检测筛选获得遗传稳定的纯合株系。载体构建与菌株活化根据实验需求构建植物表达载体,将目的基因、特异性启动子、终止子、抗性筛选标记(潮抗性、草铵抗性为水稻常用筛选标记)插入二元载体T-DNA区域,测序验证序列无误后,将重组载体导入EHA105等农杆菌感受态细胞,筛选阳性单菌落,活化备用。2.水稻愈伤组织诱导选取饱满无破损的水稻成熟种子,去除外壳,经过酒精、次梯度无菌消毒后,接种于愈伤诱导培养基。26–28℃避光暗培养2–3周,诱导种子盾片产生淡黄色、颗粒状、致密的胚性愈伤组织,剔除褐化、水渍化的无效愈伤,挑选胚性愈伤作为转化受体。番茄基因转化-武汉贝科新肽公司(图)由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司拥有很好的服务与产品,不断地受到新老用户及业内人士的肯定和信任。我们公司是商盟认证会员,点击页面的商盟客服图标,可以直接与我们客服人员对话,愿我们今后的合作愉快!)
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