癌组织原位杂交实验步骤：1.将准备做原位杂交的样本常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。2.玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O21份+蒸馏水10份混合，室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。4.暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶（1ml3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀），37℃或室温消化3--30分钟（视标本新旧、厚薄自行调整）。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。阻断内源性过氧化物酶：滴加3%1甲1醇-H2O2，室温避光孵育15min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。杂交：倾去预杂交液，滴加含探针has-circ-ST6GALNAC6probe杂交液，浓度6ng/ul，恒温箱37度杂交过夜。杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多，分子病理技术服务，可以增加甲酰胺洗涤。滴加封闭液：滴加封闭血1清（正常兔血1清），室温30min。滴加鼠抗地1高辛标记过氧化物酶（anti-DIG-HRP）：倾去封闭液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min，后PBS洗3次×5min。分子病理学诊断主要应用于以下几个方面：1、对于肿l瘤易感基因的检测，对于肿l瘤高危人群的筛检具有实用价值，如检测GSTπ基因以判定个体暴露于致癌物是的致癌危险性。2、肿l瘤相关病毒的检测，如采用原位杂交方法检测标本中HPV、EBER等病毒。3、疑难肿l瘤的诊断和分类，尤其在鉴别诊断淋巴细胞增l生性疾病与淋巴细胞性肿l瘤上有着强大的特异性和可靠性。4、肿l瘤的个体化治l疗，能够根据肿l瘤发生l发展不同阶段分子水平的特点，对肿l瘤的个体化和预见性治l疗具有指导意义。5、肿l瘤的预后判断，如采用荧光原位杂交技术（FISH）检测HER-2基因在乳l腺l癌病例中的表达情况，配合术后治l疗，指导临床用药选择。分子病理技术服务-科锐诺生物科技由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司拥有很好的服务与产品，不断地受到新老用户及业内人士的肯定和信任。我们公司是商盟认证会员，点击页面的商盟客服图标，可以直接与我们客服人员对话，愿我们今后的合作愉快！)