冷冻透射电镜（cryo-TEM）无需化学固定与染色，将样品快速浸入液态玻璃化冷冻，在液氮温度下成像；能保留外泌体天然结构（膜、内部成分），适合高分辨率三维重构（冷冻电子断层扫描cryo-ET）；缺点是设备昂贵、样品制备门槛高。超薄切片TEM外泌体经/双固定、脱水、树脂包埋后，切成40–90nm超薄切片，染色后观察；适合观察细胞内多囊体释放外泌体的原位结构，或外泌体群体的内部细节。扫描电镜（SEM）电子束扫描样品表面成像，主要看外泌体在基底上的分布与表面形貌；需喷金导电处理，分辨率略低于TEM，不适合观察内部膜结构。标志性分子检测是外泌体鉴定的，ISEV推荐检测的阳性标志物包括跨膜蛋白CD63、CD9、CD81，溶质蛋白TSG101、Alix等，同时需检测Calnexin等阴性标志物，排除杂质干扰。常用检测方法包括WesternBlot（WB）与流式细胞术：WB通过电泳分离、转膜、孵育等步骤，检测特定蛋白条带，可验证标志物的存在，外泌体提取，但操作繁琐、灵敏度较低；流式细胞术借助荧光标记与外泌体表面抗原结合，可快速、定量检测表面标志物表达，确定外泌体纯度与数量，但对样本纯度要求较高，易出现假阳性结果。与扫描电镜不同，TEM需要将样品制备成超薄切片（厚度通常为50~100nm）或直接将纳米级样品吸附在载样网上，确保电子束能够穿透样品。对于外泌体样品，通常采用负染法或正染法进行染色处理，以增强样品与背景的对比度，便于观察外泌体的形态和结构——负染法是利用高电子密度的重金属盐（如磷钨酸、醋酸铀）包裹外泌体表面，使背景呈现深色，外泌体呈现亮白色的“亮核暗晕”形态；正染法则是让重金属盐渗透到外泌体内部，使外泌体呈现深色的“暗核亮背景”形态，两种染色方法各有优势，可根据研究需求选择使用。外泌体提取-贝科新肽由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司是从事“原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选”的企业，公司秉承“诚信经营，用心服务”的理念，为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询！联系人：夏先生。)