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意义在研究DNA分子原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双键分子的特点,应用带有标记的(有性同位素,如3H、35S、32P、荧光素生物素、等非性物质)DNA或RNA片段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA)片段进行杂交,然后可用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在并定位;用原位杂交技术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性,可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。目前,我国已稳定开展的分子病理技术主要有显色原位杂交、荧光原位杂交、PCR、荧光定量PCR、基因芯片和DNA测序技术DNA原位杂交主要用于基因定位、特异基因(如病原微生物基因)检测等;RNA原位杂交则用于基因表达检测。原位杂交技术的优点是操作简单,可直接定位组织,价格低廉,信号稳定,储存方便,可做组织学评价,是目前应用较多的分子病理技术之一。既要充分保留被测核酸,(特别是RNA)不被降解,又要尽可能维持原有组织或细胞的形态结构。步骤:基本与免1疫组织化学技术相似,tunel技术服务,即组织要求新鲜和迅速投入固定液。固定液为4%多聚甲醛/0.1MPBS(PH7.0-7.6),含有1/1000DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。取材过程中避免手指、唾液和未经RNA酶抑制处理的器具接触标本。冷冻切片以厚5~30um佳,40℃烤箱内干燥2小时后储存在-80℃超低温冰箱,在-20℃可保存2~3周,在-70℃可保存数月之久。tunel技术服务-科锐诺(推荐商家)由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。行路致远,砥砺前行。武汉科锐诺生物科技有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴,更矢志成为技术合作具有竞争力的企业,与您一起飞跃,共同成功!)
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