.杂交（1）盛有2×SSC的塑料盘同，将干烤的滤膜飘浮在液面上，浸湿5分钟。（2）将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起，放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿，放到位于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中，应缓缓摇动滤膜，防止它们粘在一起。（3）用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去细菌碎片，以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。（4）将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中，在适宜温度（即在水溶液中杂交时用68℃，而在50%甲酰胺中杂交时用42℃）下，预杂交1-2小时。（5）将32P标记的双链DNA探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜（1）在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/LNaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。（2）用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/LNaOH重复步骤（1）。（3）吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/LTris·Cl(pH7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。（4）吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/LNaCl、0.5mol/LTris·Cl(pH7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。（5）将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定DNA。（6）将固定在膜上的DNA与32P标记的RNA进行杂交。滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗。.滴加生物素化鼠抗地1高辛：37℃60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，植物原位杂交测试服务，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。.苏1木素复染，充分水洗。酒精脱水，二甲1苯透明，封片。植物原位杂交测试服务-科锐诺生物由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司位于湖北省武汉市江夏区神墩四路666号武汉国英种子A栋1楼。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前科锐诺在技术合作中享有良好的声誉。科锐诺取得全网商盟认证，标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。科锐诺全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。)