GaMYB2在洋葱表皮细胞中的瞬时表达分析：采用基因轰击的方法，用包裹质粒的金粉对洋葱表皮进行轰击，暗培养过夜后，慢病毒载体构建，在激光共聚焦显微镜下进行观察，从图A中可以看出对照GFP空载体在整个洋葱细胞均能看到绿色荧光，为组成型表达；从图B中发现GaMYB2-GFP的融合表达载体只能在细胞核中能看到绿色荧光，这进一步证明该蛋白不具有跨膜蛋白结构，定位在细胞核中，具有转录因子的一般特征。为什么有的共定位图片中叶绿体通道是玫红色？在拟南芥、、玉米、大麦、小麦等材料中，种植培养苗子时是正常接受光照的，叶片中含有大量叶绿体，而叶绿素在640nm左右的激发光下可产生红色的自发荧光。当在这些含叶绿体较多的受体材料中做共定位实验时，共定位marker一般为红色荧光（在560nm左右的激发光下），实验及共聚焦拍摄时两个波长通道的荧光互不影响，但视野下看着比较混淆，尤其叠加后二者不易分清，因此只是在颜色显示上将叶绿体自发荧光设置为玫红色，以显示和共定位marker的区别。为什么有的基因定位结果与预想的不一致？对于一个特定的定位载体，只要荧光表达较好，其定位结果是确定的，不会随人为意愿或操作而改变。至于有时候和预想的结果不一样，可能和蛋白本身、选择的表达载体以及荧光蛋白融合方式等有关。为什么有的普通定位结果出来后无法准确判断其定位位置？细胞中的细胞器复杂且多样，除一些常见的、特征比较明显的细胞器外，有些细胞器在激光共聚焦下形状比较相似，例如：线粒体、过氧化物酶体、高尔基体等细胞器，它们的荧光表达形状可能都是点状，因此不易区分。这时可以结合基因的其他功能研究来判断其可能表达的位置。另外，蛋白表达本身也是一个复杂的过程，涉及到多个合成场所及转运过程，自身表达情况可能比较复杂，因此不易判断具体的表达位置。慢病毒载体构建-贝科新肽由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司是湖北武汉,化学试剂的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、创新发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在贝科新肽领导携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈，共创贝科新肽更加美好的未来。)