实验步骤（以石蜡组织切片RNA原位杂交为例）样本制备组织固定：用甲醛等固定剂保存组织形态和核酸（避免RNA降解）；包埋与切片：将固定组织石蜡包埋，切成5-10μm薄片并贴附于载玻片。预处理脱蜡：用、乙醇去除石蜡，暴露组织；通透处理：用蛋白酶K等消化组织蛋白，增加探针对细胞的穿透性；变性（仅DNA原位杂交）：高温使DNA双链解旋为单链（RNA原位杂交无需此步骤，因RNA为单链）。探针杂交将标记的探针溶液滴加于样本，在适宜温度（如37-65℃）下孵育数小时至过夜，使探针与目标RNA特异性结合。洗涤用不同浓度的盐溶液洗涤样本，去除未结合的游离探针，降低背景信号。信号检测若为荧光探针：直接用荧光显微镜观察荧光信号；若为生物素/探针：通过亲和素-生物素复合物或结合标记物，再用酶（如辣根过氧化物酶）催化显色剂（如DAB）产生可见信号。结果分析观察信号的位置（如细胞内、组织区域）、强度和分布，荧光原位杂交技术，结合形态学特征解读结果。关键组成要素1.探针探针是与目标核酸互补的核酸片段，是原位杂交的“检测工具”，其设计直接影响技术的特异性和灵敏度：类型：根据目标核酸类型可分为DNA探针、RNA探针（cRNA探针）、寡核苷酸探针等。标记方式：性标记（如32P、3?S）：灵敏度高，但需防护，已逐渐被非性标记替代；非性标记：如荧光素（FITC、Cy3）、生物素、等，安全性高，易检测。2.样本需保留核酸的原始位置和结构，常见样本类型：组织切片（冷冻切片或石蜡包埋切片）；细胞涂片、爬片；染色体标本（用于染色体原位杂交）。3.杂交条件杂交温度、盐浓度、探针浓度等需优化，以确保探针与目标核酸、特异性结合（避免非特异性杂交）。荧光原位杂交技术-贝科新肽(推荐商家)由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司是从事“原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选”的企业，公司秉承“诚信经营，用心服务”的理念，为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询！联系人：夏先生。)