一.原位杂交天1.重新水化和固定1）吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。2）置换成30％的PBST溶液，放置5分钟3）置换成PBST溶液，染色体荧光原位杂交，放置5分钟，重复一次4）置换成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟5）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）1）用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，荧光原位杂交，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。2）用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。3）用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。4）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。怎样保证原位杂交实验操作时的温度?建议仪器操作，人工操作的话要注意：（1）对荧光原位杂交操作过程中可能使用的一些仪器进行温控检查，不符合要求的进行更换。（2）尽可能地保持环境温度在20度以上。（3）针对需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。（4）同时检测的样本不超过4块，操作一定要迅速，植物原位杂交，实验人员要注意一些小部件的温度，尤其是在冬季。和其它实验方法一样，原位杂交，必须同时设对照试验以证明其实验结果特异性。对照试验的设置须根据核酸探针和靶核苷酸的种类和现有的可能条件去选定。ISHH的优点是它的高度特异性，它可测定组织、培养的单个细胞或细胞提取物中的核苷酸含量。应用高敏感度的性标记cRNA探针在理想的ISHH的实验条件下检测mRNA，其敏感度可达到20个mRNA拷贝/每个细胞。由于双链DNA的稳定性，在用ISHH定位DNA时很少发生丢失，降解，其敏感性高到能够显示在染色体铺片上，有时甚至在组织切片上的单个基因拷贝。正因为如此，对ISHH结果的解释应持慎重态度，特别是前人未报告过的新发现。植物原位杂交-原位杂交-武汉贝科新肽公司由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司是一家从事“原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选”的公司。自成立以来，我们坚持以“诚信为本，稳健经营”的方针，勇于参与市场的良性竞争，使“原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选”品牌拥有良好口碑。我们坚持“服务至上，用户至上”的原则，使贝科新肽在化学试剂中赢得了客户的信任，树立了良好的企业形象。特别说明：本信息的图片和资料仅供参考，欢迎联系我们索取准确的资料，谢谢！)