外泌体分离提取方案。主要方案包括：1、差速超1速离心法；适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品；2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法；适用于血1清、脑脊液等小体积的样品；3、超滤提取法；适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法，做进一步的提取。外泌体是细胞外囊泡的一种，其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似，电镜下，显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中，通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括：透射电镜（形态鉴定）、NTA检测（粒径及浓度鉴定）、WB（分子标志物）。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一，可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好，外泌体miRNA测序技术服务，纯度较高的外泌体样品，粒径分布在30-150nm，原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量，对每一个样品，都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日，可当天到样当天出结果。外泌体上的TNF家族蛋白不能被膜型金属蛋白酶切割，故较为稳定，同时借助膜形成三聚体，具有很强的诱导细胞凋亡的活性。而且，人们认为外泌体的转运TNF家族蛋白，与各种炎1症疾病和自身免1疫疾病的产生相关。例如，从类风1湿关1节炎患者的滑膜成纤维细胞中释放出来的外泌体上，聚集高浓度的膜结合型TNF-α，会加重类风1湿关1节炎病情。实验室采用Zetaview（品牌：ParticleMetrix）进行外泌体浓度粒径测试服务。其方法即纳米颗粒跟踪分析（NanoparticleTrackingAnalysis，NTA），原理是对每个颗粒的布朗运动进行追1踪和分析，结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NTA技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一；相较于其他表征方式，NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。Zetaview包含的微电泳技术，也可进行zeta电位的检测。目前配备为488nm波长的激光器，且搭配对应的滤光片，可以测量荧光抗1体标记的外泌体。外泌体miRNA测序技术服务-科锐诺由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司为客户提供“外泌体,透射电镜,扫描电镜,石蜡切片等技术服务”等业务，公司拥有“科锐诺”等品牌，专注于技术合作等行业。，在湖北省武汉市江夏区神墩四路666号武汉国英种子A栋1楼的名声不错。欢迎来电垂询，联系人：王经理。)