癌组织原位杂交实验步骤：1.将准备做原位杂交的样本常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。2.玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O21份+蒸馏水10份混合，室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。4.暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶（1ml3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀），37℃或室温消化3--30分钟（视标本新旧、厚薄自行调整）。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。原位杂交（insituhybridization）将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交，使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放1射性或非放1射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物原位杂交的应用范围：①细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；②感1染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳1头状瘤1病毒和巨细胞病毒DNA的检测；③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；④基因在染色体上的定位；⑤检测染色体的变化，分子病理技术服务，如染色体数量异常和染色体易位等；⑥分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定，某些肿1瘤的诊断和生物学剂量测定等。科锐诺生物科技-分子病理技术服务由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。行路致远，砥砺前行。武汉科锐诺生物科技有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴，更矢志成为技术合作具有竞争力的企业，与您一起飞跃，共同成功!)