组织原位杂交(Tissueinsituhybridization），ISH，即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术原位杂交技术的基本原理利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。1.两条核苷酸单链片段，动物组织原位杂交，在适宜的条件下，通过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA双键分子2.应用带有标记的（有性同位素，如3H、35S、32P，荧光素、生物素、等非性物质)DNA或RNA片段作为核酸探针，GISH，与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA）片段进行杂交3.用自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在与定位用原位杂交术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。预杂交1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。2）用等体积的HYB＋取代HYB－。3）60℃水浴，预杂交4小时以上。杂交1）吸去预杂交的HYB＋，加上100ul已加入探针的HYB＋溶液（探针浓度约为1ng/ul）..2）60℃温浴过夜。注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。在ISHH，原位杂交，整个实验周期是比较长的，实验程序也比较繁杂，而杂交在ISHH整个实验中可被认为是“短兵相接”的一步。杂交前的一切准备工作如增加组织通透性都是为了在杂交这一步骤中核酸探针能进入细胞或组织与其内的靶核苷酸相结合。因此，杂交是ISHH中关键的而且是重要的一个环节。杂交是将杂交液滴于切片组织上，加盖硅化的盖玻片，防止孵育过程中的高温（50℃左右）导致杂交液的蒸发。为保证杂交所需的湿润环境，可将其放在盛有少量5×SSC或2×SSC（standardsalinecitrate，SSC）溶液的硬塑料盒中进行孵育。杂交液的成分和预杂交液基本相同，所不同的是加入了标记的核酸探针和硫酸葡聚糖。ISH-武汉贝科新肽-原位杂交由武汉贝科新肽科技有限公司提供。行路致远，砥砺前行。武汉贝科新肽科技有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴，更矢志成为化学试剂具有竞争力的企业，与您一起飞跃，共同成功!)