
荧光原位杂交-武汉贝科新肽公司
杂交(1)盛有2×SSC的塑料盘同,将干烤的滤膜飘浮在液面上,浸湿5分钟。(2)将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起,放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿,放到位于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中,应缓缓摇动滤膜,防止它们粘在一起。(3)用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去细菌碎片,以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。(4)将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中,在适宜温度(即在水溶液中杂交时用68℃,而在50%甲酰胺中杂交时用42℃)下,预杂交1-2小时。原位杂交技术(insituhybridization)是以标记的核酸分子为探针,荧光原位杂交,在组织细胞原位检测特异核酸分子的技术。使含有特异序列、经过标记的核酸单链即探针,在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交,再以自显影或细胞化学方法对标记探针进行探测,从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。可以检测cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各种种属的标本,包括哺乳动物、爬行动物、菌、植物标本。也可以检测组织芯片。预杂交1)每个管中置换成大约300ulHYB-溶液,60℃水浴5分钟,避免振荡。2)用等体积的HYB+取代HYB-。3)60℃水浴,预杂交4小时以上。杂交1)吸去预杂交的HYB+,加上100ul已加入探针的HYB+溶液(探针浓度约为1ng/ul)..2)60℃温浴过夜。注:杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等,温度越低,探针结合越好,温度越高,背景越小。荧光原位杂交-武汉贝科新肽公司由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司在化学试剂这一领域倾注了诸多的热忱和热情,贝科新肽一直以客户为中心、为客户创造价值的理念、以品质、服务来赢得市场,衷心希望能与社会各界合作,共创成功,共创辉煌。相关业务欢迎垂询,联系人:夏先生。)