外泌体分离提取方案。主要方案包括：1、差速超1速离心法；适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品；2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法；适用于血1清、脑脊液等小体积的样品；3、超滤提取法；适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法，做进一步的提取。外泌体是细胞外囊泡的一种，其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似，电镜下，显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中，通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括：透射电镜（形态鉴定）、NTA检测（粒径及浓度鉴定）、WB（分子标志物）。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一，胞外囊泡透射电镜检测，可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好，纯度较高的外泌体样品，粒径分布在30-150nm，原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量，对每一个样品，都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日，可当天到样当天出结果。铁死亡主要有以下几个特点：①铁死亡，细胞死亡过程中伴随着大量的铁离子的累积，同时还会出现脂质过氧化，ROS升高，也有一些调控铁稳态和脂质过氧化代谢等方面的基因发生变化，②铁死亡，在细胞的细微结构中，会出现比正常细胞小的线粒体，且线粒体膜皱缩，同时线粒体嵴减少或消失，外膜破碎，但细胞核中形态变化不明显。据国际细胞外囊泡学会（ISEV）在2014年的提议，外泌体鉴定3个标志：透射电镜（transmissionelectronmicroscope，TEM）、粒径（NanoparticleTrackingAnalysis，NTA）、蛋白标志物（WesternBlot，WB）。外泌体透射电镜TEM鉴定外泌体大小、形态，判断样本是否含有外泌体。外泌体透射电镜分辨率为0.1~0.2nm，适合外泌体双层囊膜超微结构观察，可观测样本中是否存在外泌体样结构（通常为茶托型或一侧凹陷的半球形），同时可测量外泌体大小。检测平台：TecnaiTMG2SpiritBioTWIN检测结果：三张透射电镜图片，尽可能体现完整的外泌体形态（如有）检测周期：10-15个工作日胞外囊泡透射电镜检测-科锐诺(在线咨询)由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司是湖北武汉,技术合作的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、创新发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在科锐诺领导携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈，共创科锐诺更加美好的未来。)