在ISHH，整个实验周期是比较长的，染色体原位杂交，实验程序也比较繁杂，而杂交在ISHH整个实验中可被认为是“短兵相接”的一步。杂交前的一切准备工作如增加组织通透性都是为了在杂交这一步骤中核酸探针能进入细胞或组织与其内的靶核苷酸相结合。因此，杂交是ISHH中关键的而且是重要的一个环节。杂交是将杂交液滴于切片组织上，加盖硅化的盖玻片，防止孵育过程中的高温（50℃左右）导致杂交液的蒸发。为保证杂交所需的湿润环境，可将其放在盛有少量5×SSC或2×SSC（standardsalinecitrate，SSC）溶液的硬塑料盒中进行孵育。杂交液的成分和预杂交液基本相同，植物原位杂交，所不同的是加入了标记的核酸探针和硫酸葡聚糖。杂交（1）盛有2×SSC的塑料盘同，将干烤的滤膜飘浮在液面上，浸湿5分钟。（2）将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起，放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿，放到位于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中，应缓缓摇动滤膜，防止它们粘在一起。（3）用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去细菌碎片，以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。（4）将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中，在适宜温度（即在水溶液中杂交时用68℃，而在50%甲酰胺中杂交时用42℃）下，预杂交1-2小时。怎样保证原位杂交实验操作时的温度?建议仪器操作，原位杂交，人工操作的话要注意：（1）对荧光原位杂交操作过程中可能使用的一些仪器进行温控检查，染色体荧光原位杂交，不符合要求的进行更换。（2）尽可能地保持环境温度在20度以上。（3）针对需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。（4）同时检测的样本不超过4块，操作一定要迅速，实验人员要注意一些小部件的温度，尤其是在冬季。染色体原位杂交-武汉贝科新肽公司-原位杂交由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司是湖北武汉,化学试剂的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、创新发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在贝科新肽领导携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈，共创贝科新肽更加美好的未来。)