菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜（1）在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/LNaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。（2）用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/LNaOH重复步骤（1）。（3）吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/LTris·Cl(pH7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。（4）吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/LNaCl、0.5mol/LTris·Cl(pH7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。（5）将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定DNA。（6）将固定在膜上的DNA与32P标记的RNA进行杂交。原位杂交天1.重新水化和固定1）吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。2）置换成30%的PBST溶液，放置5分钟3）置换成PBST溶液，放置5分钟，重复一次4）置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟5）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）1）用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，植物原位杂交，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。2）用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。3）用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。4）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。2.预杂交1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。2）用等体积的HYB+取代HYB－。3）60℃水浴，预杂交4小时以上。3.杂交1）吸去预杂交的HYB+，加上100ul已加入探针的HYB+溶液（探针浓度约为1ng/ul）..2）60℃温浴过夜。注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。基因芯片又称DNA芯片或DNA微阵列。其原理是在固体载体(硅片、玻片、硝1酸纤维素膜)上按照特定的排列方式集成大量已知DNA/cDNA片段，形成DNA/cDNA微矩阵。基因芯片技术是一门新兴的技术，由于该技术能在一次实验中自动、快速、敏感地同时检测数千条序列，而且获得的序列信息高度特异、稳定。根据探针类型分为DNA芯片和cDNA芯片，前者用于检测基因突变，实现肿1瘤早期诊断、判断预后及治1疗;后者用于检测基因表达，对肿1瘤进行发现性分类和预测性分类。植物原位杂交-科锐诺生物(在线咨询)由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司是从事“外泌体,透射电镜,扫描电镜,石蜡切片等技术服务”的企业，公司秉承“诚信经营，用心服务”的理念，为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询！联系人：王经理。)