目前，我国已稳定开展的分子病理技术主要有显色原位杂交、荧光原位杂交、PCR、荧光定量PCR、基因芯片和DNA测序技术。显色原位杂交(chromogenicinsituhybridization，CISH)技术是分子生物学、组织化学及细胞学相结合产生的一门新兴技术，是利用核酸分子单链间碱基互补的原理，将地1高辛或生物素标记的外源核酸探针与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成双链杂交分子，通过过氧化物酶或碱性磷酸酶的呈色反应将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。根据探针种类不同可分为DNA原位杂交和RNA原位杂交。.杂交（1）盛有2×SSC的塑料盘同，将干烤的滤膜飘浮在液面上，浸湿5分钟。（2）将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起，放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿，染色体原位杂交技术服务，放到位于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中，应缓缓摇动滤膜，防止它们粘在一起。（3）用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去细菌碎片，以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。（4）将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中，在适宜温度（即在水溶液中杂交时用68℃，而在50%甲酰胺中杂交时用42℃）下，预杂交1-2小时。（5）将32P标记的双链DNA探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。原位杂交天1.重新水化和固定1）吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。2）置换成30%的PBST溶液，放置5分钟3）置换成PBST溶液，放置5分钟，重复一次4）置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟5）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）1）用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。2）用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。3）用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。4）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。2.预杂交1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。2）用等体积的HYB+取代HYB－。3）60℃水浴，预杂交4小时以上。3.杂交1）吸去预杂交的HYB+，加上100ul已加入探针的HYB+溶液（探针浓度约为1ng/ul）..2）60℃温浴过夜。注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。染色体原位杂交技术服务-科锐诺(图)由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司是湖北武汉,技术合作的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、创新发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在科锐诺领导携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈，共创科锐诺更加美好的未来。)