武汉科锐诺生物(查看)-分子病理技术服务
意义在研究DNA分子原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双键分子的特点,应用带有标记的(有性同位素,分子病理技术服务,如3H、35S、32P、荧光素生物素、等非性物质)DNA或RNA片段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA)片段进行杂交,然后可用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在并定位;用原位杂交技术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性,可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。原位杂交第三天1)用1ml含10%热灭清的MABT溶液置换溶液,放置摇床上25分钟,然后用1mlMABT置换,25分钟,再用1mlMABT溶液置换,一小时以上,后用1mlMABT溶液置换,25分钟。2)用1ml1mM左旋米睉的Stainingbuffer洗三次,每次放置五分钟。3)将胚胎转入十六孔板中,吸去stainingbuffer,加上300ulBMPurpleAPSubstrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上锡箔纸以避光,避免摇动,室温下显色。4)每隔一小时观察胚胎是否开始显色5)将显色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗两三次后加上4%多聚甲醛固定,拍照。6)4C冰箱保存。将少数菌落转移到纤维素滤膜上(1)在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。(2)用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上,再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种(或打点)。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后,在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。(3)倒置平板,于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。(4)用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂,在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。(5)用Parafilm膜封好主平板,倒置贮放于4℃,直至获得杂交反应的结果。(6)裂解细菌,按本段下面所述方法,使释放的DNA结合于纤维素滤膜。分子病理技术服务-武汉科锐诺生物由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司实力不俗,信誉可靠,在湖北武汉的技术合作等行业积累了大批忠诚的客户。科锐诺带着精益求精的工作态度和不断的完善创新理念和您携手步入辉煌,共创美好未来!)
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