原位杂交第二天1.1）将探针回收，放于－20C保存（通常探针可重复使用十次左右）。2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分钟，重复一次。3）置换2XSSCT1ml，60℃，放置15分钟。4）置换0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分钟，提供酵母双杂交技术服务，重复一次。2.1）用MABT洗两次，每次五分钟，放在摇床轻轻摇动。2）室温下加1ml1：2：7溶液，时间为一小时。3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连，4C冰箱过夜。阻断内源性过氧化物酶：滴加3%1甲1醇-H2O2，室温避光孵育15min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。杂交：倾去预杂交液，滴加含探针has-circ-ST6GALNAC6probe杂交液，浓度6ng/ul，恒温箱37度杂交过夜。杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤。滴加封闭液：滴加封闭血1清（正常兔血1清），室温30min。滴加鼠抗地1高辛标记过氧化物酶（anti-DIG-HRP）：倾去封闭液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min，后PBS洗3次×5min。适用场景1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用；2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点；3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白；4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽；5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物；6、绘制蛋白质相互作用图谱。酵母双杂交技术的优点1、无需纯化蛋白；2、检测在活1细胞内进行，可以在一定程度上代表体内的真实情况；3、检测的结果是基因表达产物的积累效应，因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用；4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库，并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。提供酵母双杂交技术服务-科锐诺(推荐商家)由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司为客户提供“外泌体,透射电镜,扫描电镜,石蜡切片等技术服务”等业务，公司拥有“科锐诺”等品牌，专注于技术合作等行业。，在湖北省武汉市江夏区神墩四路666号武汉国英种子A栋1楼的名声不错。欢迎来电垂询，联系人：王经理。)