细胞培养中常见的污染及解决方法原生动物污染原生动物污染后，细胞培养基变得轻微浑浊。在显微镜下，大量的小点来回移动。虽然此时细胞仍能生长，但繁殖速度减慢，细胞生长状态不好，边缘不清，变得不透明。原生动物与细胞形成共生关系。同时，原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍，但以细胞为主，因为原生动物的数量相对较少，因而对细胞的正常生长没有影响，只有当它们达到一定数量时，才终爆发成为循环。解决方法：原生动物污染的原因有很多，细胞实验外包选哪家，如液体消毒问题、操作问题、环境问题等，如果细胞足够，果断丢弃被污染的细胞和复苏细胞。如果要保留，需要购买使用相关的灭菌试剂。细胞实验介绍——慢病毒建立稳转细胞系慢病毒包装：公司使用3质粒慢病毒包装系统，慢病毒系统使用pLKO.1-EGFP、psPAX2、pMD2.G，过表达慢病毒系统使用pLVX-AcGFP、psPAX2、pMD2.G三质粒系统，将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至HEK293T细胞中，培养48h后，收集上清。使用genecopo公司慢病毒颗粒纯化试剂盒将慢病毒纯化。纯化后留取部分检测病毒滴度，其余病毒冻存于-80℃冰箱中。滴度检测：将病毒颗粒使用梯度稀释，分别293T细胞，细胞实验外包公司，72h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算病毒滴度。细胞：在病毒前一天对细胞进行计数，接种约10000个细胞于12孔板中，培养过夜后使用无培养基稀释病毒，加入12孔板中对细胞进行，病毒数量根据推荐细胞的MOI加入（若无推荐MOI，需做病毒梯度：1，5，细胞实验外包，10，50，1005个梯度对细胞），6h后去除含病毒溶液，细胞实验，加入完全培养基细胞培养，培养48h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光强度。同时加入puromycin对细胞筛选，筛选约2周时间。细胞筛选好后，使用定量PCR和Westernblot检测目的基因的稳定表达情况。实验流程：慢病毒质粒构建-HEK293T细胞培养-质粒转染293T细胞-病毒收集-病毒纯化-病毒滴度检测-细胞-稳转细胞筛选-稳转细胞鉴定结果示例：图A病毒滴度检测；B目的细胞病毒效果图骨sui内皮祖细胞的分离培养方法:使用密度梯度离心法汲差速贴壁法联合的方法培养内皮祖细胞，在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化，使用Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1双荧光染色、流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD133表达情况.结果与结论:培养前4d细胞增殖不明显第5~10天迅速增殖，并可见细胞集落及线状结构形成培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1的功能流式细胞仪检测体外培养第十天的细胞，CD133+细胞占19.2%，CD34+细胞占28.7%，CD34+/CD133+细胞占19.1%.说明密度梯度离心法联合差速贴壁法可在体外有效分离培养大鼠骨sui内皮祖细胞.细胞实验-南京英瀚斯生物科技-细胞实验外包公司由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。行路致远，砥砺前行。南京英瀚斯生物科技有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴，更矢志成为技术合作具有竞争力的企业，与您一起飞跃，共同成功!)