3D细胞培养3D多细胞肿liu球是在体外应用组织培养方法使肿liu细胞以多细胞集聚体的形式生长成为具有三维结构的球体。与传统的2D贴壁细胞培养模型相比，3D多细胞肿liu球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用，从而更加贴近肿liu组织中相应的病理生理特征。因此，3D多细胞肿liu球培养模型已经逐渐应用于gan细胞培养和分化、ai症研究、yao物和毒性筛选及组织工程等特定应用中。虽然3D多细胞肿liu球模型具有更显著的实体肿liu生理相关性，但是与2D贴壁细胞培养模型相比，获得大量相对统一的3D多细胞肿liu球模型需要-系列的培养过程和表征手段。二、脂质体转染操作步骤1、操作步骤[方法一]：(1)细胞培养：取6孔培养板(或用35mm培养皿)，向每孔中加入2mL含1～2×105个细胞培养液，丽水细胞，37℃CO2培养至40%～60%汇合时(汇合过分，转染后不利筛选细胞)。(2)转染液制备：在聚苯乙稀管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液：用不含培养基稀释1-10μgDNA，终量100μL，B液：用不含培养基稀释2-50μgLR，终量100μL，轻轻混合A、B液，室温中置10-15分钟，基因编辑技术，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染(如出现沉淀可能因LR或DNA浓度过高所致，应酌情减量)。(3)转染准备：用2mL不含培养液漂洗两次，再加入1mL不含培养液。(4)转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6～24小时，吸除无转染液，换入正常培养液继续培养。(5)其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。注意：转染时切勿加，对转染效率有很大影响。关于细胞培养的常见问题:Q:细胞在培养过程中出现碎片如何处理？A:贴壁细胞在移除原培养液后，用PBS冲洗2-3遍；悬浮细胞离心移除原培养液后，加入PBS重悬，离心移除PBS;一般建议重复上述步骤2-3遍，用800-1000rpm离心3-5分钟。Q：细胞冻存能放在-80℃保存吗？A：长期保存的细胞应当放在液氮（-196℃）中保存，短时间（一般1周-2周）可以存放在-80℃。Q：培养瓶是用密封盖好，癌细胞，还是用透气盖好？A：都可以。只是在使用密封盖培养瓶时，感受态细胞，瓶盖旋至约2/3，不要完全拧紧，预留约1/3以便细胞可以透气；有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。Q:何谓FBS，FCS，CS，HS?A:Fetalbovineserum(FBS)和FetalCalfSerum(FCS)之间没有区别，都是指胎牛；FCS不是正规命名，尽量不使用。CalfSerum（CS）则是指小牛。HorseSerum(HS)则是指马。基因编辑技术-英瀚斯生物科技公司-丽水细胞由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司位于江苏省南京市栖霞区和燕路371号东南大学国家大学科技园科创楼A301。在市场经济的浪潮中拼博和发展，目前英瀚斯在技术合作中享有良好的声誉。英瀚斯取得全网商盟认证，标志着我们的服务和管理水平达到了一个新的高度。英瀚斯全体员工愿与各界有识之士共同发展，共创美好未来。)