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染色质免l疫共沉淀技术(ChIP)基于体内分析而发展的染色质免l疫沉淀分析Chromatinimmunoprecipitationassaykit,ChIP)技术可以真实、完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白。由于ChIP采用甲醛固定活l细胞或者组织的方法,因此能比较真实的反映细胞内TF与Promoter的结合情况,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。近年来,这种技术得到不断的发展和完善。采用结合微阵列技术在染色体基因表达调控区域检查染色体活性,是深入分析癌l症、心血l管病以及中央神经系统紊乱等疾病主要通路的一-种非常有效的工具。染色质免l疫沉淀分析(ChIP)的基本原理是在活l细胞状态下,当用甲醛处理时,dna检测,相互靠近的蛋白与蛋白、蛋白与核酸(DNA或RNA)之间会产生共价键。细胞内,当F与Promoter相互结合时,它们必然靠的比较近或者契合在一起,这个时候用甲醛处理,能使它们之间产生共价键。固定的蛋白质DNA复合物通过超声或酶处理将其随机切断为-定长度范围内的染色质小片段然后通过抗原抗l体的特异性识别反应沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNAl片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。通过qPCR或二代测序,筛选与目的蛋白互作的未知DNA信息。二、使用说明1、装载探针对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的细胞,先装载探针,后用活性氧阳性对照及自己感兴趣的刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞,先用活性氧阳性对照及自己感兴趣的刺激细胞,后装载探针。原位装载探针:本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000用无培养液稀释DCFH-DA,使终浓度为10微摩尔/升。去除细胞培养液,加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜,荧光定量pcr,通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA的体积为1毫升。37℃细胞培养箱内孵育20分钟。用无细胞培养液洗涤细胞三次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。单核苷酸多态性(SNP)实验SNP(SingleNucleotidePolymorphisn即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个SNP,河南pcr,无论是比较于度多态性(RFLP)分析还是微标记(STR),pcr引物设计,都要广泛得多。实验方法原理:SNP(SingleNucleotidePolymorphisn即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性(Polymorphism)。据估计,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个SNP,无论是比较于限制性段长度多态性(RFLP)分析还是微标记(STR),都要广泛得多。SNP是我们考察遗传变异的单位,据估计,人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。-般认为,相邻的SNPs倾向于一起遗传给后代。于是,我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点称作单体型(haplotypeb大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型(每个具有至少5%的频率),它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。-个染色体区域可以有很多SNP位点,但是我们一-旦掌握了这个区域的单体型,就可以只使用少数几个标签SNPs(tagSNP)来进行基因分型,获取大部分的遗传多态模式。河南pcr-英瀚斯生物科技公司-dna检测由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。南京英瀚斯生物科技有限公司是江苏南京,技术合作的见证者,多年来,公司贯彻执行科学管理、创新发展、诚实守信的方针,满足客户需求。在英瀚斯领导携全体员工热情欢迎各界人士垂询洽谈,共创英瀚斯更加美好的未来。)